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荧光摄影基础常识

编辑:上海路阳生物时间:2022-03-18 08:30:10浏览1109 次

信息摘要:

因单反相机是非常智能的相机,大家使用时候基本都是调整到auto档位,相机能够感知环境光线的明暗,自动调整曝光参数。拍出来的照片非常nice。但荧光图像拍照环境和常规照片不一样,荧光拍照时候,有强烈的激发光,需要用荧光拍照滤镜将激发光过滤掉,让荧光蛋白的荧光成像,有时候荧光表达的不是很亮,大家需要调整单反相机的ISO、快门速度和光圈大小。

很多做研究的老师和同学,在使用路阳的荧光蛋白激发光源时候遇到拍照问题,明明用荧光蛋白观察眼镜能够清晰看到荧光蛋白的表达,但很的单反相机拍不出来的荧光照片。总觉得荧光蛋白的拍照滤镜有问题,今天,大家工程师将单反相机拍荧光照片的基础常识给大家普及一下。

因单反相机是非常智能的相机,大家使用时候基本都是调整到auto档位,相机能够感知环境光线的明暗,自动调整曝光参数。拍出来的照片非常nice。但荧光图像拍照环境和常规照片不一样,荧光拍照时候,有强烈的激发光,需要用荧光拍照滤镜将激发光过滤掉,让荧光蛋白的荧光成像,有时候荧光表达的不是很亮,大家需要调整单反相机的ISO、快门速度和光圈大小。下面将这几个参数给大家做一个简单先容:

  1. 荧光拍照需要的设备:

    激发光源、拍照滤镜、单反相机、三脚架。

    QQ图片20220318084319.png

  2. 安装转接环

    如果您的单反相机镜头不是67mm,需要一个转接环才能安装到相机镜头上。镜头尺寸一般标注在镜头的最前面一般标注为Φxx mm,如右图为直径77mm的镜头。先把转接环旋到镜头上,再把滤镜旋到转接环上即可。

    OIP-C (1).jpg

  3. 单反相机的拨轮:

QQ图片20220318084536.png


4. 荧光摄影主拨轮选择M档

模式转盘的档位先容:

全自动拍摄模式:此模式也叫傻瓜模式,不用设置任何参数直接可以拍摄照片。

P档程度模式:也叫自动可调模式,自动档,快门、光圈由相机来设定,也可以自己调节。

TV快门优先:快门优先多用于拍摄运动的物体上,特别是在体育运动拍摄中最常用。

AV光圈优先:光圈优先是一种曝光控制模式,适合拍摄人像 微距。

M档手动曝光:手动曝光模式,通过前拨轮设置快门速度,背面的快速转盘设置光圈大小。

B档快门:就是B门,长时间曝光或拍夜景用。即不松手快门不关闭。(须用三角架和快门线,否则影像发虚)同时通过前拨轮或背面的快速转盘还可调整光圈参数。

C档:用户自定义模式。

SCN全自动场景模式(人像风景夜景等多种拍摄模式)

CA创意自动:在此模式下用户可以通过菜单调整图像亮度、景深、照片风格等功能设置。

5.光圈:

光圈是一个用来控制光线透过镜头,进入机身内感光面的光量的装置,通常在镜头内。通俗讲就是光圈像一个门一样,门大进光多,照片越亮;门小进光少,照片越暗。

表达光圈大小用F值:

完整的光圈值系列如下: F1, F1.4, F2, F2.8, F4, F5.6, F8, F11, F16, F22, F32, F44, F64

数值越小,进光量越大(光圈越大),数值越大,进光量越小(光圈约小)

光圈两大作用:控制进光量,控制景深

如何调整光圈:

佳能单反相机在M档的时候拨动付拨盘可调整快门速度,按住AV按钮并转动付拨轮调整光圈大小。

佳能60D是先按住Q键,再转动付拨轮

R-C (2).jpg

6. ISO调整:荧光拍摄建议选择ISO200

 ISO:(International Organization for Standardization的缩写)

在胶片时代,胶片的感光度就是指底片对于光线的敏感程度,也可以理解为底片对于光线的反应速度。如今的ISO也是指相机中CMOS图像感应器对光线的敏感度。ISO对于成片最终的清晰度起到至关重要的作用。在M(Manual Exposure)档下,能够控制照片曝光量的就只有光圈、快门速度与ISO三项数值。

1. 光圈越大,进入相机的光就越多。光圈越小,进入相机的光就越少。

2. 快门速度越慢,进入相机的光就越多。快门速度越快,进入相机的光就越少。

3. ISO越低照片越暗,ISO越高照片越亮。ISO越低噪点越少,ISO越高噪点越多。

在保证照片正常曝光的情况下,ISO越低越好。

ISO怎么设置:

按下ISO档位,并旋转手柄轮盘,调到相应ISO

QQ图片20220318085427.png

7. 荧光摄影建议设置的参数:

选择M档:关闭闪光灯,ISO200,光圈F5.6,快门1/60

因单反相机的镜头尺寸不一样,按键设置不同,参数设置会有差异。

建议大家ISO200下,分别调整光圈和快门速度,找到一个理想设置参数。

GFP荧光照片时候,有LUV-495A和LUV-520A两种拍照滤镜可选,LUV-495A不能隔离叶绿素的荧光。LUV-520A是窄带滤色片,拍出来是纯绿的图片,效果对比如下:大家也可参考《荧光蛋白拍照滤镜LUV-495A和LUV-520A的区别

LUV-520-495A.jpg

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